加布里安·纳西门托·波西诺
问题陈述:体液免疫反应对犬利什曼病的发病机制有害,抗体滴度与疾病更严重的临床症状相关。研究将 IgG 亚类和症状与疾病联系起来,但对 IgG N-糖基化的研究很少。糖基化谱的变化可能会促进促炎或抗炎反应,具体取决于哪种聚糖发生改变(岩藻糖、甘露糖、半乳糖和唾液酸)。该小组已证明,感染利什曼病的人的 IgG 糖基化谱会发生变化。然而,人类和狗的糖基化谱不同,狗的岩藻糖含量更高。我们的目标是评估特定抗利什曼原虫抗体的 IgG Fc 部分的岩藻糖基化谱是否存在差异,以了解发病机制。方法论和理论方向:我们使用酶联凝集素测定法 (ELLA),用不同的酶(a1-2、4、6 岩藻糖苷酶 O (New England BioLabs®)、IgGZERO LE (Genovis®) 和 PNGase F (New England BioLabs®))处理 L. infantum 抗原,以脱去糖基化聚糖残基,并将抗体滴度与 ELISA(酶联免疫吸附试验)中发现的抗体滴度进行比较,这些血清样本来自塞尔希培联邦大学的 Roque Pacheco de Almeida 教授提供的 45 只狗血清样本(15 只出现症状,15 只无症状,15 只未感染)。进行蛋白质印迹法以确认抗原的脱糖基化。发现:处于循环后期的 L. infantum 前鞭毛体显示岩藻糖残基,PNGase F 可能是抗原脱糖基化的一种选择。与对照组相比,有症状组和无症状组的抗体滴度在统计学上更高。在所采用的条件下,有症状、无症状和对照犬的血清学在不同抗原中的岩藻糖量方面没有差异。结论和意义:PNGase F 应以不同的浓度用于抗原脱糖基化,并且需要进行更多测试才能看到针对特定抗利什曼原虫抗体的 IgG 的 Fc 部分岩藻糖基化谱的差异。