伊斯克拉·赛诺娃
本研究的主要思想是开发一种抑制 COVID-19 复制的方法,包括体外和体内。在这方面,主要目标是使用适当的 siRNA 对适当的病毒基因进行 RNA 干扰和/或激活细胞产生适当的 microRNA。应进一步研究不同生物分子(蛋白质-蛋白质、蛋白质-RNA、蛋白质-DNA、蛋白质-脂质、蛋白质-碳水化合物、DNA-DNA、DNA-RNA、RNA-RNA、DNA-DNA 等)之间的细胞内和细胞外相互作用,强调这些过程,以及细胞内保护机制,以确定膜蛋白与不同细胞骨架成分通过级联调节途径的各自直接和/或间接相互作用。因此,主要任务是:
1. 将具有RNA基因组的病毒株接种于体外培养细胞中(如果可能的话,属于冠状病毒科)。
2. 使用适当的 siRNA(或适当的细胞产生的 microRNA)处理接种病毒的细胞,以对抗病毒 RNA 基因,这对于病毒在细胞中的渗透和病毒复制是必要的。
3. 评估所测试的 siRNA 和/或 microRNA 对感染相同 RNA 病毒株的适当实验动物的体内影响。
4. 通过免疫组织化学、免疫印迹 (Western-blot) 测定、免疫荧光测定、流式细胞术和/或酶联免疫吸附试验 (ELISA)、聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 及随后的下拉和质谱测定、分光光度测定、核磁共振 (NMR) 测定、激光照射、在特定荧光染料或纳米粒子存在下的 SEM、TEM、共聚焦显微镜测定以及免疫染色程序研究体外和体内抗病毒免疫力;
5. 此外,还应提供足够的免疫反应。在这方面,应研究从非淋巴和非髓细胞类型生产免疫球蛋白/抗体和膜受体糖蛋白的既定可能性,以及适当的内部(遗传)、表观遗传和外部因素以及属于这三个类别的各种因素组合的影响。此外,还应影响通用机制,这些机制一方面负责正常/非恶性细胞分化、支持足够的免疫反应以及预防恶性细胞转化,另一方面负责细胞衰老和死亡。在这方面,应激活影响 CRISPR/Cas 通用生物系统功能的基因和蛋白质。完成所有步骤后,可以评估测试的 siRNA 和/或 microRNA 对 COVID-19 感染患者/志愿者的体内影响(感染后 24-48 小时内的初始阶段)。